跟着我国工农业的快速发展，重金属欺压问题日益严重[1]。铅(Pb)是一种欺压畛域广、生物毒性大、容易被植物接纳的欺压物性爱画面，有接头标明，Pb不错禁止植物种子的萌生，对幼苗的孕育形成一定流程的影响[2]。
接受植物和菌根真菌共生体的要道来建设泥土重金属欺压，已被屡次阐述是行之灵验的要道[3-4]。与菌根菌近似，内生真菌具有高度的特异性，可在寄主植物中渡过近乎一齐的生涯周期况且不使寄主发挥出任何症状[5]。内生真菌也不错与植物形成共生体。有接头标明，禾草内生真菌赋予宿主植物很强的竞争才气，不错普及植物的抗旱性[6-7]、抗盐碱性[8]等。也有接头标明，内生真菌侵染能改善宿主对Al[9]、Zn[10]和Cu[11]的耐受性，进而不错促进宿主对泥土重金属欺压的建设才气[12]。
德兰臭草(Melica transsilvanica)是禾本科臭草属多年生草本植物，植株较高大，在我国仅产改过疆北疆地区，生于海拔800~2000 m的落叶阔叶林下或干旱灌丛中及曙光干山坡上[13]。近几年在新疆乌鲁木皆、石河子等地采样时，发现大量德兰臭草孕育在公路两旁。将辘集到的种子及植株用苯胺蓝染色后，发现该禾草带有内生真菌E.guerinii[14]，且带菌率渊博在90%以上[15]。当今，对于内生真菌和植物的共生体增强宿主植物重金属耐烦方面的干系接头报谈较少，频年才受到学者的和顺。
本接头通过比较德兰臭草带菌种子与不带菌种子在不同浓度重金属Pb的抑止下，种子萌生、生物量以及幼苗对重金属的吸附量等成见，接头在重金属Pb抑止下内生真菌对宿主植物的影响，为新疆地区重金属欺压泥土建设提供基础府上和表面依据。
1 材料与要道 1.1 试验材料试验材料为德兰臭草种子，2016年采于新疆乌鲁木皆县小渠子乡围栏内(43°34′ 23.52″ N、87°05′ 04.92″ E、海拔1387 m)。考取颗粒足够、大小均匀的种子，接受高温干热的要道获取德兰臭草不带菌(E-)种子[16]。将带菌(E+)种子和E-种子先用2%的次氯酸钠溶液清洗8 min，蒸馏水冲洗3~5遍，再用75%的酒精清洗5 min，蒸馏水清洗数遍。接受滤纸发芽床进行种子萌生试验。辞别向每个培养皿中加入10 mL不同浓度的Pb (NO3)2溶液，以加蒸馏水看成对照，每日不雅察种子发芽数(以胚芽长度达到种子一半为种子发芽的判断步调)。
1.2 Pb抑止处分接受双身分扫数当场区组想象，对德兰臭草种子进行重金属Pb抑止试验。身分之一是Pb2+浓度，设11个浓度水平，辞别为0、5、100、300、800、1200、1500、2000、2500、3000、3500 mg·L-1；身分之二是内生真菌侵染景色：E+和E-。每个处分建树三个重叠，每个培养皿中舍弃50粒种子。试验执续15 d。
1.3 测定成见与要道萌生率、发芽势、萌生指数、活力指数按照以下公式贪图：
式中：Gt为不同技术发芽数；Dt为相应发芽天数。
式中：S为种苗的鲜质地。
重金属抑止处分实现后，用直尺测量幼苗的芽长、根长；用分析天平称量每个样本的鲜质地、干质地。Pb含量的测定：石墨炉原子接纳法(TAS-990)。
将样本用去离子水洗净、晾干，105 ℃杀青30 min，70 ℃烘干至质地恒定，准确称量植物样品1 g于消煮管中，加硝酸/高氯酸(4:1)搀和溶液10 mL，浸泡过夜，在LWY-84B控温式远红外消煮炉上将溶液消解至无色透明，冷却至室温，用0.5 mol·L-1的硝酸屡次洗涤消煮管，洗液合并于10 mL容量瓶中并定容至刻度，上机测定。
1.4 数据分析接受SPSS 19.0对所测数据进行统计分析，用平均值±步调误默示测定为止。接受光棍分方差分析磨练带菌与不带菌种子间和Pb抑止处分间的各异，接受双身分方差分析磨练内生真菌侵染与Pb抑止之间的交互作用，用Duncan法对统一成见测得的数据进行多重比较。接受Excel 2003进行作图。
2 为止与分析 2.1 Pb抑止下内生真菌侵染对德兰臭草种子萌生的影响如表 1所示，不同浓度的Pb抑止溶液对德兰臭草种子的萌生成见均具有极权臣的影响(P < 0.01)；内生真菌侵染对德兰臭草种子萌生率、发芽势无权臣影响(P >0.05)，对发芽指数、活力指数具有极权臣的影响(P < 0.01)；Pb抑止与内生真菌侵染的交互作用对种子发芽势无权臣影响(P >0.05)，对其他萌生成见均具有极权臣的影响(P < 0.01)。
表 1 内生真菌侵染和重金属Pb抑止对德兰臭草影响的双身分方差分析
Table 1 Two-way ANOVA of the influence of endophyte infection and Pb stress on Melica transsilvanica
2.1.1 对种子萌生率的影响
Pb抑止下内生真菌侵染对德兰臭草种子萌生率的影响，如图 1所示。5 mg·L-1的抑止浓度对种子萌生有促进作用，其他浓度的Pb抑止对德兰臭草种子的萌生率均具禁止作用，禁止流程跟着Pb浓度的升高而迟缓增强。当Pb抑止浓度在5、100、300 mg·L-1时，种子萌生率与对照支配。
在5 mg·L-1抑止下，E+种子萌生率与对照的各异不权臣，E-种子萌生率权臣高于E+(P < 0.05)。在100、300 mg·L-1抑止下，E-种子与对照比较各异不权臣，但权臣跳跃疏浚浓度下E+种子萌生率15个百分点和12个百分点(P < 0.05)。当Pb抑止浓度高于300 mg·L-1时，萌生率急剧着落，Pb抑止浓度是800 mg· L-1时，E+种子萌生率为51%，E-萌生率为46%，不错近似地合计该浓度是德兰臭草在Pb抑止下的半效应浓度；当Pb抑止浓度为800~3500 mg·L-1时，E+种子萌生率均高于E-种子，尤其在抑止浓度为800、1200、2000、2500、3000 mg · L-1时，各异达权臣水平(P < 0.05)。
2.1.2 对种子发芽势的影响如图 2所示，跟着Pb抑止浓度增多，德兰臭草种子的发芽势呈裁减趋势，均权臣低于对照(P < 0.05)。Pb抑止浓度为5、100 mg·L-1时，E+的发芽势高于E-，但不具有权臣各异(P >0.05)。抑止浓度为300~3000 mg·L-1时，E+发芽势权臣高于E- (P < 0.05)。
2.1.3 对种子发芽指数的影响德兰臭草种子的发芽指数随Pb抑止浓度的增多而迟缓裁减，均权臣低于对照(P < 0.05)，如图 3所示。抑止浓度为100~3000 mg·L-1时，E+种子发芽指数权臣高于E-(P < 0.05)。3500 mg·L-1抑止浓度下，E+、E-的发芽指数辞别为1.22、0.71，二者各异不权臣(P> 0.05)。
2.1.4 对种子活力指数的影响如图 4所示，Pb抑止浓度为5 mg·L-1时，种子的活力指数权臣高于对照(P < 0.05)。德兰臭草种子的活力指数随Pb抑止浓度的增多而迟缓裁减，均权臣低于对照(P < 0.05)。100~1500 mg·L-1抑止浓度下，E+的活力指数权臣高于E-(P < 0.05)。2000~3500 mg·L-1抑止浓度下，E+的活力指数高于E-，但二者不具有权臣各异(P >0.05)。
2.2 Pb抑止下内生真菌侵染对德兰臭草幼苗孕育成见的影响重金属Pb抑止、内生真菌侵染均极权臣影响德兰臭草幼苗的根长、芽长，且重金属Pb抑止和内生真菌侵染之间的交互作用对根长、芽长也具有极权臣的影响(P < 0.01，表 1)。
跟着Pb抑止浓度的增多，德兰臭草芽长呈裁减趋势，根长呈先升高后裁减的趋势(表 2)。当Pb浓度为5 mg·L-1时，E+幼苗芽长权臣低于对照(P < 0.05)。当Pb抑止浓度大于100 mg·L-1时，E+植株的芽长均权臣大于疏浚浓度下E-植株(P < 0.05)。Pb抑止浓度为100、300、800 mg·L-1时，E-芽长辞别权臣低于E+芽长66%、84%、66%。
表 2 Pb抑止和内生真菌侵染对德兰臭草幼苗孕育成见的影响
Table 2 Effects of Pb stress and endophyte infection on growth index of M. transsilvanica seedling
Pb浓度为5 mg·L-1时，幼苗根长权臣高于对照(P < 0.05)，E+与E-各异不权臣；Pb浓度为100 mg·L-1时，E+根长权臣高于对照，且E+根长权臣高于E- (P < 0.05)；当抑止浓度为100、300 mg·L-1时，E+植株根长权臣高于E-植株(P < 0.05)。Pb抑止对德兰臭草胚根孕育的禁止作用大于对胚芽孕育的禁止作用，胚根在Pb抑止浓度大于1200 mg·L-1时不再孕育。
2.3 Pb抑止下内生真菌侵染对德兰臭草幼苗生物量的影响重金属Pb抑止、内生真菌侵染均极权臣影响德兰臭草幼苗的干质地、鲜质地，且重金属Pb抑止和内生真菌侵染之间的交互作用对幼苗干质地、鲜质地也具有极权臣的影响(P < 0.01，表 1)。
跟着Pb抑止浓度的增多，德兰臭草种子的鲜质地、干质地均呈先增多后减小的趋势，如表 2所示。Pb抑止浓度为5、100 mg·L-1时，幼苗干质地、鲜质地均高于对照，浓度为5 mg·L-1时，幼苗干质地、鲜质地权臣高于对照(P < 0.05)。Pb抑止浓度为100~1200 mg·L-1时，E+鲜质地权臣高于疏浚浓度E-幼苗的鲜质地(P < 0.05)；Pb抑止浓度为5~300 mg·L-1，E-干质地权臣大于疏浚浓度下E+的干质地(P < 0.05)，Pb抑止浓度在800 mg·L-1时，E+与E-干质地各异不权臣(P >0.05)，而Pb浓度在1200 mg·L-1时，E+干质地权臣大于E- (P < 0.05)。
2.4 不同Pb处分下内生真菌侵染对德兰臭草幼苗中Pb含量的影响重金属Pb抑止、内生真菌侵染均极权臣影响德兰臭草幼苗中Pb含量，且重金属Pb抑止和内生真菌侵染之间交互作用对Pb含量也具有极权臣影响(P < 0.01，表 1)。
德兰臭草幼苗中Pb含量见表 3。跟着Pb抑止浓度的增多，植株体内Pb含量呈延续上涨的趋势。统一Pb抑止浓度下，E-幼苗中Pb含量均高于E+植株，Pb抑止浓度为0、5、100、800 mg·L-1时，E+与E-幼苗中Pb含量各异不权臣(P >0.05)，其余高浓度抑止下，E+植株内的Pb含量均权臣低于E-植株(P < 0.05)。
表 3 不同Pb处分下内生真菌侵染对德兰臭草幼苗中Pb含量的影响(μg·g-1)
Table 3 Effects of endophyte infection on Pb content of M. transsilvanica seedling under different Pb concentrations (μg·g-1)
3 究诘
种子萌生期和幼苗期是植物对外界环境因子的明锐期，径直影响植物的孕育和发育[17]。当外源重金属Pb干预环境后会被植物根系接纳，随后转运到植物地上部分，从而影响植物的平方孕育[18]。Pb抑止对种子发芽率、发芽势的影响呈“高抑低促”的表象[19]。Pb偶然在低浓度促进黑麦草(Lolium perenne)、醉马草(Achnatherum inebrians)种子的萌生和幼苗孕育，而在高浓度条目下作用违反[20-21]。郭婷婷[22]在黑麦草对Pb欺压泥土建设才气的实验接头中，也得到了近似的论断。本接头也得出一致的论断，5 mg·L-1的Pb溶液能促进德兰臭草种子萌生，普及种子萌生率，权臣普及种子活力，促进幼苗根长和生物量(P < 0.05)。当Pb抑止浓度大于100 mg·L-1时，种子萌生受到禁止。这可能是因为高浓度抑止可通过碎裂胚乳卵白的水解而禁止种子萌生[23]。
从胚芽和胚根的孕育来看，重金属Pb抑止对德兰臭草种子胚根和胚芽的孕育具有权臣的禁止作用，且对胚根孕育的禁止作用大于对胚芽的影响，胚根在抑止浓度大于1200 mg·L-1时不再孕育。有接头标明，可能是种子萌生初期，胚根来源冲破种皮吸水，使得胚根的重金属积贮大于胚芽，受抑止影响更大[24]。接头标明，内生真菌偶然普及宿主植物对重金属Cu[1]、Zn[25]、Al[26]的耐受性，从而灵验缓解重金属破坏对植物种子萌生的影响。本接头为止也标明，内生真菌侵染偶然灵验缓解Pb溶液对德兰臭草种子各项萌生、孕育成见的禁止流程，尤其当Pb溶液浓度大于800 mg·L-1时，E+种子的萌生率和发芽势都权臣高于E-种子(P < 0.05)。分析其原因，种子萌生时的养分都来自于种子胚乳，而胚乳中的养分是有限的，种子中内生真菌可促进宿主植物本人对外界的不利条目作出实时反馈，通过促进根的孕育使植株偶然伸向远处，幸免或减少与重金属的战争与吸附，以保证德兰臭草在重金属抑止下偶然更好地孕育[23]。本接头中疏浚Pb抑止浓度下E+植株根长高于E-植株(P < 0.05)也阐述了这小数。
在线看片接头标明内生真菌的侵染可灵验缓解Cd破坏对披碱草(Elymus dahuricus)、醉马草种子萌生和幼苗孕育的影响[27-28]。同期，本接头也发现内生真菌侵染不错裁减德兰臭草幼苗中Pb含量，尤其当Pb溶液浓度大于800 mg·L-1时，E+幼苗中Pb含量权臣低于E-幼苗(P < 0.05)。这可能是因为内生真菌促进德兰臭草胚根分泌了大量的酚类物资，酚类物资不错与Pb螯合，减少Pb在宿主地下部分的积贮，从而使宿主的Pb含量有所裁减[29-30]。Malinowski等[11]接头发现内生真菌侵染会导致高羊茅植物根系分泌物中酚类物资含量增多，酚类物资螯合重金属，使重金属的生物活性裁减。该学者还发现高羊茅根系分泌物会使Al、Cu等重金属的毒性权臣裁减[31]，因此也不错进一步证明注解内生真菌侵染偶然灵验缓解Pb抑止对德兰臭草各项种子萌生、孕育成见的禁止流程。
4 论断(1) 5 mg·L-1的Pb溶液能促进种子萌生，权臣增多幼苗根长和生物量。
(2) 内生真菌侵染偶然缓解Pb抑止对宿主的各项萌生、孕育成见的禁止流程，尤其当Pb溶液浓度大于800 mg·L-1时，缓解后果更为权臣。
(3) 当Pb溶液浓度大于800 mg·L-1时性爱画面，内生真菌侵染权臣裁减了德兰臭草幼苗中Pb含量。